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大鼠軟骨細(xì)胞的制備方法一起來了解一下

更新時(shí)間:2022-04-13點(diǎn)擊次數(shù):1700
       大鼠軟骨細(xì)胞是軟骨組織中的主要細(xì)胞成分。位于軟骨陷窩中。軟骨細(xì)胞的核小,呈圓形或橢圓形,有1至數(shù)個(gè)核仁,胞質(zhì)略嗜堿性。細(xì)胞形狀依軟骨組織而異:在透明軟骨,靠近軟骨膜的細(xì)胞呈橢圓形,其長軸與軟骨表面平行,深部的細(xì)胞逐漸變?yōu)閳A形或卵圓形,常常兩個(gè)或多個(gè)聚集成群,稱為同源細(xì)胞群;在彈性軟骨,細(xì)胞的形態(tài)基本上與透明軟骨的相似;在纖維軟骨,細(xì)胞略呈卵圓形,夾在膠原纖維束之間,單個(gè)存在、成對存在或排列成單行。
  大鼠軟骨細(xì)胞制備:
  1)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的取材、培養(yǎng)及細(xì)胞一般生物活性測定
  取4~5周齡,體重185~200g的SD大鼠,斷頸處死,置于5%CO2混和氣體環(huán)境中,37℃恒溫箱內(nèi)單層培養(yǎng),隔3d換液,8~10d達(dá)85%融合后進(jìn)行傳代。
  2)倒置相差顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察
  取每代貼壁軟骨細(xì)胞于倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況。倒置相差顯微鏡觀察:原代軟骨細(xì)胞9~12h部分貼壁,大部分在24h時(shí)完成貼壁,部分細(xì)胞開始伸展,細(xì)胞體積較小,呈多角形,均勻散在生長,48h內(nèi)基本上鋪展成三角或多角形;7~10d達(dá)到90%融合形成單層細(xì)胞,細(xì)胞仍呈多角形或短梭形,細(xì)胞排列緊密,折光性強(qiáng)。
  3)軟骨細(xì)胞透射電鏡觀察胰酶消化各代次軟骨細(xì)胞,離心后先于離心管培養(yǎng)3d,送福建醫(yī)大電鏡室制片觀察。經(jīng)離心管培養(yǎng)3d后,固定標(biāo)本進(jìn)行電鏡技術(shù)觀察,原代P0培養(yǎng)軟骨細(xì)胞為卵圓形或圓形,細(xì)胞核清晰,較多異染色質(zhì)分布于核膜邊緣和核內(nèi)。
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